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      在流式實(shí)驗(yàn)中，除了配色和對(duì)照之外，我們還會(huì)經(jīng)常遇到另一個(gè)棘手問(wèn)題，那便是Fc效應(yīng)——許多細(xì)胞表面表達(dá)的Fc受體，能夠識(shí)別并結(jié)合抗體的Fc端，導(dǎo)致抗體被標(biāo)記到非目標(biāo)細(xì)胞上，造成了結(jié)果的不準(zhǔn)確和不真實(shí)。

      以兔抗為例，兔IgG作為我們最常用的抗體類型之一，其Fc段與人IgG1的Fc段氨基酸序列同源性很高，尤其FcγR結(jié)合區(qū)域：

圖1 兔IgG與人IgG1 Fc段氨基酸序列比對(duì)

      兔IgG很容易與人FcγR產(chǎn)生結(jié)合，我們通過(guò)親和力測(cè)定實(shí)驗(yàn)（BLI法）發(fā)現(xiàn)，野生型兔IgG（Rabbit IgG-WT）與人Fc受體所有亞型均有強(qiáng)結(jié)合，二者間的親和力基本和人IgG與人Fc受體一致：

圖2 野生型兔IgG與人FcγR親和力測(cè)定

      因此我們?cè)趯?shí)驗(yàn)時(shí)，通常需要額外增加一個(gè)步驟：使用Fc受體封閉試劑來(lái)消除Fc效應(yīng)（Fc block）。這一操作不僅增加了實(shí)驗(yàn)難度和成本，而且Fc受體封閉試劑的封閉效果也是參差不齊；比如我們最近采購(gòu)的一個(gè)Fc受體封閉試劑，有一定封閉效果，但效果不盡如人意：

圖3 Fc受體封閉試劑效果測(cè)試

      有沒(méi)有可能，

      找到一個(gè)從根源上解決Fc效應(yīng)的好辦法？

      FcZero-rAb?新型骨架流式抗體正式上線！

      針對(duì)以上研究痛點(diǎn)和難點(diǎn)，Proteintech的研發(fā)團(tuán)隊(duì)基于ABCE?單個(gè)B細(xì)胞抗體發(fā)現(xiàn)平臺(tái)和FcZero?沉默技術(shù)平臺(tái)開(kāi)發(fā)了一系列的FcZero-rAb?新型骨架流式抗體，該系列創(chuàng)新產(chǎn)品采用了全新的抗體骨架，從根源上消除了由Fc受體結(jié)合引起的非特異性背景信號(hào)。

圖4 FcZero-rAb?抗體的Fc沉默原理

      相較于傳統(tǒng)骨架流式抗體的先天不足，F(xiàn)cZero-rAb?新型骨架流式抗體突破了行業(yè)壁壘，具有FcZero?沉默技術(shù)平臺(tái)帶來(lái)的多重技術(shù)革新優(yōu)勢(shì)：① 完全消除Fc效應(yīng)，②定點(diǎn)定量標(biāo)記，③僅需一種同型對(duì)照，④高穩(wěn)定性。

      1. FcZero-rAb?抗體完全消除Fc效應(yīng)

      FcZero-rAb?新型骨架流式抗體的核心在于FcZero?沉默技術(shù)，Proteintech通過(guò)該技術(shù)在Rabbit IgG的Fc CH2區(qū)域進(jìn)行關(guān)鍵氨基酸位點(diǎn)突變，屏蔽了抗體與Fc受體的結(jié)合，形成Fc silencing（Fc效應(yīng)沉默）。

      該技術(shù)完全消除了兔IgG的Fc段與人Fc受體的結(jié)合，包括FcγRI (CD64)、FcγRII (CD32) 和FcγRIII (CD16)等多種Fc受體。

圖5 FcZero-rAb?IgG與人FcγR親和力測(cè)定

      通過(guò)FcZero-rAb?新型骨架流式抗體分析人PBMCs樣本，我們可以看到，與傳統(tǒng)流式抗體或者傳統(tǒng)流式抗體+Fc受體封閉劑相比，F(xiàn)cZero-rAb?新型流式抗體背景更干凈，分群更清晰。

圖6 FcZero-rAb?抗體Fc沉默效果對(duì)比

      2. FcZero-rAb?抗體定點(diǎn)定量標(biāo)記

      FcZero-rAb?新型骨架流式抗體采用了生物定點(diǎn)標(biāo)記技術(shù)，每一個(gè)裸抗分子的Fc段都有兩個(gè)明確標(biāo)記位點(diǎn)，可以定點(diǎn)定量標(biāo)記所需偶聯(lián)物。

      與市面上常用的化學(xué)隨機(jī)標(biāo)記相比，生物定點(diǎn)標(biāo)記技術(shù)不僅能夠保證偶聯(lián)物遠(yuǎn)離抗體活性中心，僅在Fc末端而不影響抗體的抗原識(shí)別與結(jié)合能力，同時(shí)還能確保信號(hào)強(qiáng)度的均一性和批次間標(biāo)記情況的重復(fù)性。

圖7 生物定點(diǎn)標(biāo)記和化學(xué)隨機(jī)標(biāo)記效果對(duì)比

      3. FcZero-rAb?抗體僅需一種同型對(duì)照

      傳統(tǒng)流式抗體即使來(lái)源于同一個(gè)物種，也可能有多個(gè)抗體亞型，比如小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b和IgGM（下圖右）；而FcZero-rAb?新型骨架流式抗體全系列采用了同一種新型抗體骨架，僅需一種同型對(duì)照即可，不僅能夠降低實(shí)驗(yàn)難度，還能有效節(jié)省成本。

圖8 FcZero-rAb?抗體僅需一種同型對(duì)照

      4. FcZero-rAb?抗體可長(zhǎng)期穩(wěn)定保存

      針對(duì)FcZero-rAb?新型骨架流式抗體的全新骨架，經(jīng)SEC-HPLC純度分析、親和力測(cè)定和流式實(shí)驗(yàn)檢測(cè)，F(xiàn)cZero-rAb?新型骨架流式抗體在4℃保存1年之后，成分依舊單一穩(wěn)定，具有高生物活性。

圖9 FcZero-rAb?抗體熱加速試驗(yàn)SEC-HPLC純度分析

圖10 FcZero-rAb?抗體熱加速試驗(yàn)親和力檢測(cè)

圖11 FcZero-rAb?抗體熱加速試驗(yàn)流式檢測(cè)

      Uni-rAb?重組流式抗體同步上線！

      FcZero-rAb?新型骨架流式抗體作為革命性的新型流式抗體，一方面是基于FcZero?沉默技術(shù)平臺(tái)，另一方面則是依托ABCE?單個(gè)B細(xì)胞抗體發(fā)現(xiàn)平臺(tái)。

      ABCE?單個(gè)B細(xì)胞抗體發(fā)現(xiàn)平臺(tái)是Proteintech最新一代重組兔單克隆抗體開(kāi)發(fā)平臺(tái)，該平臺(tái)所開(kāi)發(fā)的Uni-rAb?重組兔單克隆抗體已于 2024年6月上線，其“高質(zhì)價(jià)比”快速贏得了大家的認(rèn)可和喜愛(ài)。

      如今，與FcZero-rAb?新型骨架流式抗體同步，Uni-rAb?傳統(tǒng)骨架重組流式抗體也正式亮相，它采用的是野生型Rabbit IgG抗體骨架，二者間除抗體骨架存在差異之外，其他性質(zhì)保持一致，均繼承了Uni-rAb?重組兔單克隆抗體高特異性、高親和力及高批次間一致性的優(yōu)良傳統(tǒng)。經(jīng)充分測(cè)試，Uni-rAb?傳統(tǒng)骨架重組流式抗體與經(jīng)典克隆相比具有相似或更優(yōu)越的性能。

圖12 Uni-rAb?抗體（左）與其他品牌抗體對(duì)比（右）

      Uni-rAb?傳統(tǒng)骨架重組流式抗體能夠兼容其他傳統(tǒng)流式抗體體系，可作為流式實(shí)驗(yàn)的常規(guī)選擇；FcZero-rAb?新型骨架流式抗體能夠提供更高質(zhì)量的支持，可完美屏蔽Fc效應(yīng)干擾，拿到更真實(shí)更可靠的實(shí)驗(yàn)成果。二者可滿足不同的實(shí)驗(yàn)場(chǎng)景需求。

      作為專業(yè)抗體生產(chǎn)商，Proteintech在創(chuàng)新的道路上從未止步。

      從兔多抗、鼠單抗、羊駝納米抗體、重組兔單抗，到如今的FcZero-rAb?新型骨架流式抗體和Uni-rAb?傳統(tǒng)骨架重組流式抗體，Proteintech持續(xù)創(chuàng)新，力爭(zhēng)通過(guò)最先進(jìn)的技術(shù)和工藝，給大家提供最優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品與服務(wù)，同時(shí)維持合理且更低的價(jià)格；讓所有的科研工作者，都能享受到技術(shù)創(chuàng)新給大家?guī)?lái)的便利和助力。

      這一次，基于最新平臺(tái)和最新技術(shù)鍛造的FcZero-rAb?新型骨架流式抗體和Uni-rAb?傳統(tǒng)骨架重組流式抗體，希望能給大家?guī)?lái)全新的體驗(yàn)！

      PS：除了產(chǎn)品研發(fā)技術(shù)的創(chuàng)新之外，Proteintech官網(wǎng)近期也將上線一個(gè)行業(yè)前所未有的創(chuàng)新功能，將通過(guò)3D結(jié)構(gòu)展示每一個(gè)抗體與抗原的結(jié)合位點(diǎn)，并可根據(jù)所限定的序列區(qū)域選擇最適配的抗體，敬請(qǐng)期待！

      FcZero-rAb?新型骨架流式抗體列表

      截止今日，Proteintech已經(jīng)上線百余個(gè)FcZero-rAb?新型骨架流式抗體和千余個(gè)Uni-rAb?傳統(tǒng)骨架重組流式抗體，前者目前可提供PE和APC兩種標(biāo)記，后者可提供9種配色，并且在ABCE?單個(gè)B細(xì)胞抗體發(fā)現(xiàn)平臺(tái)的高通量加持下，每月都能上新大量新產(chǎn)品！

      在此小P向各位老師發(fā)出誠(chéng)摯邀請(qǐng)，歡迎體驗(yàn)我們創(chuàng)新技術(shù)帶來(lái)的新一代重組流式抗體！添加微信號(hào)：JX1358874227 或者關(guān)注ProteintechGroup官方公眾號(hào)，即可申領(lǐng)試用裝和新品優(yōu)惠。

      FcZero-rAb?新型骨架流式抗體列表

      （新產(chǎn)品及新配色持續(xù)更新中）